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產(chǎn)品展示/ Product display

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重組蛋白表達純化技術服務

原核蛋白表達系統(tǒng)是迄今為止Z為成熟可靠的蛋白表達系統(tǒng),能快速表達純化各種不同來源蛋白。大量制備的重組蛋白可用于藥物篩選、結構生物學研究、細胞生物學研究、蛋白質(zhì)組學研究等的一系列生物醫(yī)學領域的研究。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2016-07-31
  • 訪  問  量:2793
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詳細介紹

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

 重組蛋白表達純化服務

原核蛋白表達系統(tǒng)是迄今為止zui為成熟可靠的蛋白表達系統(tǒng),能快速表達純化各種不同來源蛋白。大量制備的重組蛋白可用于藥物篩選、結構生物學研究、細胞生物學研究、蛋白質(zhì)組學研究等的一系列生物醫(yī)學領域的研究。


特點:

  • 本公司可以通過原核蛋白小量表達測試的工藝放大,在中試級別的體系中獲得重組蛋白。
  • 可以根據(jù)客戶的需要提供各種表達標簽,包括His、GST、MBP、NusA、 TrxA、 Sumo、 AviTag™等。
  • 本公司可以通過離子交換、透析超濾、凝膠過濾、親和層析等方法對目的蛋白進行精細的分離純化。
  • 本公司可提供靈活的標簽系統(tǒng)的純化方案,甚至復合標簽的純化方案。
  • 可獲得純度90%以上的重組蛋白,本公司的CoolCut技術還可以獲得無標簽的重組蛋白。
  • 實驗結果經(jīng)過SDS–PAGE凝膠電泳檢測。交付時間: 4–6周。
  • 具有20多種表達用菌株,可獲得高產(chǎn)的工程菌。
  • 擁有表達克隆構建、多功能標簽的選擇,密碼子優(yōu)化等相關技術服務;可有效地解決高產(chǎn)工程菌基因工程問題。

注意:

  • 本公司在本項服務中提供的重組蛋白不保證活性。
  • 本公司在本項服務中的收費需要協(xié)商,可按蛋白毫克數(shù)和純度定價;也可按過柱次數(shù)定價。

重組蛋白用途:

  • 抗原蛋白
  • 蛋白標準品
  • 蛋白活性研究

服務內(nèi)容

1. 大腸桿菌(E. coli)表達系統(tǒng)

2. 畢赤酵母(P. pastoris)表達系統(tǒng)

3. 桿狀病毒(Baculovirus)表達系統(tǒng)

4. 哺乳動物細胞表達系統(tǒng)

價格與信息

一:大腸桿菌(E. coli)表達系統(tǒng)

步驟

1. 目標基因全基因合成:

1.從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。

2.根據(jù)選用的表達系統(tǒng)對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優(yōu)化。

3.合成設計好的基因序列。

交付內(nèi)容:目的基因(在T載體或常規(guī)穿梭載體上)及測序報告。

時間:2周

步驟2. 目標基因亞克隆

1.擴增并抽提含有目標基因的載體質(zhì)粒

2.將目標基因亞克隆到合適的表達質(zhì)粒上。

3.測序驗證構建質(zhì)粒的準確性。

4.可提供表達載體(PET系列為主)

交付內(nèi)容:正確構建的重組表達質(zhì)粒,含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。

時間:2-3周

步驟3. E. coli 表達菌株轉(zhuǎn)化及篩選:

1.擴增并抽提構建好的表達質(zhì)粒。

2.將表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效的E. coli表達菌株中。

3.至少挑選5個陽性克隆于LB培養(yǎng)基中擴增并選擇合適的條件,SDS-PAGE 檢測蛋白表達情況,篩? 選出合適菌株。

4.可提供表達菌株:DH5α, *0, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue等。

交付內(nèi)容:重組質(zhì)粒的表達菌株及表達檢測報告。

時間:2-3周

步驟4. 目標蛋白表達及純化:

1.對時間,溫度以及IPTG濃度等表達條件進行優(yōu)化,誘導表達目標蛋白。

2.搖瓶培養(yǎng)1L重組細菌,通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等層析方法純化表達的重組蛋白。

3.利用蛋白酶去除不需要的純化標簽(Tag),再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體需加入合適的蛋白酶切位點)。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制zui終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性

交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白5~10mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的zui終蛋白,純度zui高可達95%以上。

時間:2-3周

說明:

1. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取任何費用。如果zui終得到的產(chǎn)品未達到合同要求而客戶又同意接受該產(chǎn)品,則雙方協(xié)商本步驟費用。

2. 如果客戶需要詳細的純化工藝,包括詳細純化條件及每步結果,則需要加收100%相應費用。

3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們zui終根據(jù)實際情況將給客戶提供zui少5mg,zui多10mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。

4. 我們提供的zui終產(chǎn)品一般為保存于常規(guī)的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質(zhì)溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統(tǒng),所以我們無法保證zui終產(chǎn)品的生物學活性,不過我們承諾將會按照zui大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。如果客戶一定要求目標蛋白活性,我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格,我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ,而如果樣品活性合格,我們將提供合同要求的相同質(zhì)量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。

5. 每次Western-blot檢測zui多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則需另收費。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現(xiàn)假陽性或是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

步驟5. 目標蛋白的再加工及詳細檢測:

1.對生物學活性要求較高的純化后蛋白產(chǎn)品進行復性研究。

2.內(nèi)毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。

3.通過HPLC,質(zhì)譜等方法詳細檢測目標蛋白的質(zhì)量

服務內(nèi)容:

1復性研究:利用多達20種不同復性緩沖液的體系,對目標蛋白進行小量復性試驗提供復性后樣品供客戶檢測,可

根據(jù)客戶要求,按照其中一種樣品的復性條件制備小量的復性蛋白,可提供具體的復性緩沖液配方及復性工藝。

2:除內(nèi)毒素,

3:過濾除菌,

4:凍干,5:HPLC檢測,

6:質(zhì)譜檢測,

7:N端測序。

交付內(nèi)容:加工后的終產(chǎn)品及相關實驗和檢測報告。

時間:2-3周

步驟6. 大規(guī)模制備:

按照小試工藝放大生物試劑規(guī)模,制備客戶需要的合格蛋白產(chǎn)品。

交付內(nèi)容:合格的目標蛋白及服務報告。

時間:協(xié)商

二:畢赤酵母(P. pastoris)表達系統(tǒng)

步驟1. 目標基因全基因合成:

1.從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。

2.根據(jù)選用的表達系統(tǒng)對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優(yōu)化。

3.合成設計好的基因序列。

交付內(nèi)容:目的基因(在T載體或常規(guī)穿梭載體上)及測序報告。

時間:2-3周

步驟2. 目標基因亞克?。?/p>

1.擴增并抽提含有目標基因的載體質(zhì)粒。

2.將目標基因亞克隆到合適的表達質(zhì)粒上。

3.測序驗證構建質(zhì)粒的準確性。

4.可提供表達載體:pPICZα和pPIC9K和pGAPCZα。

交付內(nèi)容:正確構建的重組表達質(zhì)粒,含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。

時間:2-3周

步驟3. P. pastoris表達菌株電轉(zhuǎn)化:

1.酶切線性化表達質(zhì)粒。

2.將表達質(zhì)粒通過電轉(zhuǎn)化到高效的P.pastoris表達菌株中。

3.通過PCR鑒定至少挑選5個陽性克隆。

4.可提供表達菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。

交付內(nèi)容:PCR陽性克隆及PCR結果報告

時間:2周

步驟4. P. pastoris 表達菌株篩選:

1.將5個陽性克隆于BMGY培養(yǎng)基中擴增,然后換至BMMY培養(yǎng)基中,并加入甲醇誘導表達目標蛋白。

2.SDS-PAGE電泳檢測培養(yǎng)上清中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達

3.如果培養(yǎng)上清中檢測不到表達,則通過將上清濃縮20倍作用再檢測,或通過Western-blot方法檢測目標蛋白表達(客戶需要提供相關抗體)。

交付內(nèi)容:陽性克隆菌株及表達篩選結果報告。

時間:2周

步驟5. P. pastoris表達菌株表達優(yōu)化:

1.挑選20個陽性克隆進行常規(guī)表達篩選,并對其中表達菌株優(yōu)化表達條件。

2.對挑選出來的單克隆菌株,優(yōu)化培養(yǎng)及誘導條件(培養(yǎng)基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目標蛋白的表達量。

交付內(nèi)容:三個陽性克隆菌株及優(yōu)化表達條件結果報告。。

時間:2周

步驟6. 目標蛋白表達及純化:

1.搖瓶培養(yǎng)1L重組酵母菌,誘導表達目標蛋白。

2.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

3.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制zui終產(chǎn)品質(zhì)量。

4.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白1~10mg及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒═ag)或切除純化標簽(Tag)的zui終蛋白,純度zui高可達90%以上。

時間:2-3周

說明:

1. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取任何費用。如果zui終得到的產(chǎn)品未達到合同要求而客戶又同意接受該產(chǎn)品,則雙方協(xié)商本步驟費用。

2. 如果客戶需要詳細的純化工藝,包括詳細純化條件及每步結果,則需要加收100%相應費用。

3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們zui終根據(jù)實際情況將給客戶提供zui少1mg,zui多10mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。

4. 我們提供的zui終產(chǎn)品一般為保存于常規(guī)的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質(zhì)溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統(tǒng),所以我們無法保證zui終產(chǎn)品的生物學活性,不過我們承諾將會按照zui大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。如果客戶一定要求目標蛋白活性,我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格,我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ,而如果樣品活性合格,我們將提供合同要求的相同質(zhì)量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。

5. 每次Western-blot檢測zui多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則需另收費。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現(xiàn)假陽性或是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

步驟7. 目標蛋白的再加工及詳細檢測:

1.內(nèi)毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。

2.通過HPLC,質(zhì)譜等方法詳細檢測目標蛋白的質(zhì)量。

服務內(nèi)容:

1:除內(nèi)毒素,

2:過濾除菌,

3:凍干,.

4:HPLC檢測,

5:質(zhì)譜檢測,

6:N端測序。

交付內(nèi)容:加工后的終產(chǎn)品及相關實驗和檢測報告。

時間:2周

步驟8. 大規(guī)模制備:

按照小試工藝放大生物試劑規(guī)模,制備客戶需要的合格蛋白產(chǎn)品。

交付內(nèi)容:合格的目標蛋白及服務報告。

時間:協(xié)商

三:桿狀病毒(Baculovirus)表達系統(tǒng)

步驟1. 目標基因全基因合成:

1.從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。

2.根據(jù)選用的表達系統(tǒng)對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優(yōu)化。

3.合成設計好的基因序列。

交付內(nèi)容:目的基因(在T載體或常規(guī)穿梭載體上)及測序報告。

時間:2-3周

步驟2. 目標基因亞克隆到pFastBac供體質(zhì)粒:

1.擴增并抽提含有目標基因的載體質(zhì)粒。

2.將目標基因亞克隆到pFastBac供體載體上。

3.測序驗證構建質(zhì)粒的準確性。

4.通過中抽獲得重組的質(zhì)粒DNA

交付內(nèi)容:正確構建的重組表達質(zhì)粒,含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。

時間:2-3周

步驟3. 制備重組桿狀病毒Bacmid DNA:

1.將重組的pFastBac供體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)菌株中。

2.通過抗生素平板篩選出含有重組Bacmid的菌株。

3.抽提質(zhì)粒獲得重組的桿狀病毒Bacmid DNA。

交付內(nèi)容:重組桿狀病毒Bacmid DNA,含重組質(zhì)粒的DH10Bac菌株

時間:2周

步驟4. 轉(zhuǎn)染昆蟲細胞Sf-9:

1.利用轉(zhuǎn)染試劑將重組Bacmid質(zhì)粒轉(zhuǎn)入昆蟲細胞Sf-9。

2.收集成熟的重組桿狀病毒并檢測病毒的滴度。

3.通過多次感染提高病毒的滴度,并擴增病毒數(shù)量。

4.通過SDS-PAGE和Western-blot檢測目標蛋白表達情況。

交付內(nèi)容:高滴度重組桿狀病毒,病毒滴度及蛋白表達檢測結果(如果轉(zhuǎn)染不成功,則不收取費用。如果沒有檢測到目標蛋白表達,則只收取50%實驗費用)。

時間:3周

步驟5. 目標蛋白表達及純化:

1.培養(yǎng)500ml昆蟲細胞至對數(shù)期,然后加入適量病毒感染細胞并表達目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。

3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制zui終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

6.可提供表達細胞株:Sf-9,Sf-9 Mimic,High Five。

交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白0.1~2mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的zui終蛋白,純度zui高可達90%以上。

時間:2-3周

說明:

1. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取任何費用。如果zui終得到的產(chǎn)品未達到合同要求而客戶又同意接受該產(chǎn)品,則雙方協(xié)商本步驟費用。

2. 如果客戶需要詳細的純化工藝,包括詳細純化條件及每步結果,則需要加收100%相應費用。

3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們zui終根據(jù)實際情況將給客戶提供zui少0.1mg,zui多2mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。

4. 我們提供的zui終產(chǎn)品一般為保存于常規(guī)的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質(zhì)溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統(tǒng),所以我們無法保證zui終產(chǎn)品的生物學活性,不過我們承諾將會按照zui大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。如果客戶一定要求目標蛋白活性,我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格,我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ,而如果樣品活性合格,我們將提供合同要求的相同質(zhì)量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。

5. 每次Western-blot檢測zui多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則需另收費。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現(xiàn)假陽性或是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

步驟6. 目標蛋白的再加工及詳細檢測:

1內(nèi)毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。

2通過HPLC,質(zhì)譜等方法詳細檢測目標蛋白的質(zhì)量。

服務內(nèi)容:

1:除內(nèi)毒素,

2:過濾除菌,

3:凍干,

4:HPLC檢測,

5:質(zhì)譜檢測,

6:N端測序。

交付內(nèi)容:加工后的終產(chǎn)品及相關實驗和檢測報告。

時間:2-3周

步驟7. 大規(guī)模制備:

按照小試工藝放大生物試劑規(guī)模,制備客戶需要的合格蛋白產(chǎn)品。

交付內(nèi)容:合格的目標蛋白及服務報告。

時間:協(xié)商

四:哺乳動物細胞表達系統(tǒng)

步驟1. 目標基因全基因合成:

1.從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。

2.根據(jù)選用的表達系統(tǒng)對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優(yōu)化。

3.合成設計好的基因序列。

交付內(nèi)容:目的基因(在T載體或常規(guī)穿梭載體上)及測序報告。

時間:2-3周

步驟2.:目標基因亞克隆到哺乳動物細胞表達載體

1.擴增并抽提含有目標基因的載體質(zhì)粒。

2.將目標基因亞克隆到真核表達載體上。

3.測序驗證構建質(zhì)粒的準確性。

4.通過中抽獲得重組的質(zhì)粒DNA

交付內(nèi)容:正確構建的重組表達質(zhì)粒,含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。

時間:2周

步驟3. 小量轉(zhuǎn)染并通過Western-blot檢測表達:

1.利用轉(zhuǎn)染試劑將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入合適的哺乳動物細胞中。

2.從轉(zhuǎn)染后24到72小時,每12小時取樣,通過SDS-PAGE和Western-blot檢測目標蛋白表達情況。

3.可提供表達細胞株:293,293T,NIH/3T3,COS-7,CHO。

交付內(nèi)容:目標蛋白表達結果。

時間:2周

說明:

1. 如果轉(zhuǎn)染不成功,則不收取費用。如果沒有檢測到目標蛋白表達,也要收取80%實驗費用。

2.每次Western-blot檢測zui多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現(xiàn)假陽性或? 是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

步驟4. 目標蛋白表達及純化:

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。

3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制zui終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒═ag)或切除純化標簽(Tag)的zui終蛋白,純度zui高可達90%以上。

時間:3-4周

說明:

1. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取任何費用。如果zui終得到的產(chǎn)品未達到合同要求而客戶又同意接受該產(chǎn)品,則雙方協(xié)商本步驟費用。

2. 如果客戶需要詳細的純化工藝,包括詳細純化條件及每步結果,則需要加收100%相應費用

3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們zui終根據(jù)實際情況將給客戶提供zui少0.1mg,zui多2mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。

4. 我們提供的zui終產(chǎn)品一般為保存于常規(guī)的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質(zhì)溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統(tǒng),所以我們無法保證zui終產(chǎn)品的生物學活性,不過我們承諾將會按照zui大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。如果客戶一定要求目標蛋白活性,我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格,我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ,而如果樣品活性合格,我們將提供合同要求的相同質(zhì)量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。

5. 每次Western-blot檢測zui多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則需另收費。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現(xiàn)假陽性或是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

步驟5. 目標蛋白的再加工及詳細檢測:

1.內(nèi)毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。

2.通過HPLC,質(zhì)譜等方法詳細檢測目標蛋白的質(zhì)量。通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

服務內(nèi)容:

1:除內(nèi)毒素,

2:過濾除菌,

3:凍干,

4:HPLC檢測,

5:質(zhì)譜檢測,

6:N端測序。

交付內(nèi)容:加工后的終產(chǎn)品及相關實驗和檢測報告。

時間:2周

步驟6. 篩選穩(wěn)定高表達細胞株:

1.將轉(zhuǎn)染后的哺乳動物細胞團轉(zhuǎn)到96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi),然后加入含有MTX的培養(yǎng)基。

2.當細胞長到大約2/3孔時,取培養(yǎng)上清檢測表達。

3.挑出高表達的細胞團用于下一輪篩選,并在下一次細胞培養(yǎng)基中提高MTX的濃度。

4.重復加壓篩選過程,提高細胞株的表達量直到獲得合適的穩(wěn)定表達株。

5.通過SDS-PAGE電泳檢測每步表達結果。

6.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內(nèi)容:穩(wěn)定的高表達細胞株及篩選報告。

時間:6-8周

說明:因為每個重組蛋白的表達量受多種條件影響,我們并不能保證zui終穩(wěn)定株的表達量,但一般只有瞬時表達時表達量的1/10左右。

步驟7. 大規(guī)模制備:

按照小試工藝放大生物試劑規(guī)模,制備客戶需要的合格蛋白產(chǎn)品。

交付內(nèi)容:合格的目標蛋白及服務報告。

時間:協(xié)商

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